La Copa de la Reina de Fútbol 2016 fue la 34.ª edición del campeonato, el cual se disputó entre el 18 de junio y 28 de junio de 2016. Se disputa íntegramente en la Ciudad del Fútbol de Las Rozas, en la Comunidad de Madrid.
El Atlético de Madrid se hizo con el título por primera vez en su historia.
Al igual que en la edición pasada, la Copa de la Reina tiene ocho participantes: los cuales son los ocho primeros equipos clasificados de la Primera División Femenina 2015-16. La competición se disputa por eliminatorias directas y a partido único.
En esta edición participan los 8 primeros clasificados de la Primera División Femenina 2015-16, estos son los clasificados:
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